ชื่อเต็มของตัวละครและตำแหน่งอยู่ด้านล่าง ชื่อที่เพื่อนร่วมงานและเพื่อนๆ เรียกกันจะใส่เครื่องหมายเน้นข้อความเอาไว้

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ ระดับ 3 หัวหน้ากะกลางวัน ร้อยตำรวจโท โฮราชิโอ้ "เอช" เคนส์ - CSI Level 3 Day Shift Supervisor: Lieutenant Horatio "H" Caine (แสดงโดย David Caruso) หัวหน้าแล็บอาชญากรรมของ ไมอามี่ เด็ค และหัวหน้าทีม CSI ของซีรีส์นี้ ก่อนหน้านี้เคยเป็น เจ้าหน้าที่แผนกสอบสวน ที่ กรมตำรวจนิวยอร์ก ก่อนจะย้ายมาเป็นเจ้าหน้าที่เก็บกู้วัตถุระเบิดของกรมตำรวจไมอามี่ เด็ค และได้เลื่อนขั้นจนมาเป็นหัวหน้าแล็บอาชญากรรมของ ไมอามี่ เด็ค เป็นคนที่มีบุคลิกสุขุมนุ่มลึกและใจเย็น เขามักจะใช้ความเงียบเพื่อนิ่งคิด พิจารณา มากกว่าที่จะพูด เอาจริงเอาจังกับงาน มักตาต่อตา ฟันต่อฟันกับคนร้าย และไม่เกรงกลัวต่ออิทธิพลหรือคำขู่ใดๆ ทั้งสิ้น มีบ่อยครั้งที่เรามักเห็นว่า ในความเงียบขรึมของเขา กลับแฝงไว้ด้วยความใจร้อน เขามักจะไม่ค่อยเข้าแล็บเอง แต่ถ้าเป็นคดีสำคัญเขามักจะเข้าแล็บเพื่อจัดการกับหลักฐานทุกอย่างด้วยตัวเขาเอง ลูกน้องในทีมทุกคนต่างก็เชื่อมั่นในตัวเขาและนับถือเขามาก

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ ระดับ 3 ผู้ช่วยหัวหน้ากะกลางวัน นักสืบ แคลลี่ ดูเคนส์ - CSI Level 3 Day Shift Assistant Supervisor: Detective Calleigh Duquesne (แสดงโดย Emily Procter) หญิงสาวสวย ที่เชี่ยวชาญเรื่อง กระสุนปืนและอาวุธปืน ไม่เป็นที่สองรองใคร ที่มากด้วยความสามารถ ฉายาของเธอ คือ "Bullet Girl" ความสวยหวานและความบอบบางของเธอขัดแย้งกับความเป็นจริงที่ว่า แท้ที่จริงแล้วเธอไม่เพียงแค่สวยเพียงอย่างเดียว แต่เธอทั้งเก่งและมีความสามารถรอบตัว พ่อของเธอเป็นทนาย ที่มีลักษณะนิสัยติดสุราอย่างหนักและพยายามที่จะเลิกและฟื้นฟูร่างกายของเขาหลายครั้ง ในตอนท้ายซีซั่นที่ 3 คัลเล่ก์ตัดสินใจออกจากแล็บอาวุธเพราะเหตุการฆ่าตัวตายของอดีตแฟนเก่าของเธอภายในแล็บ และย้ายมาอยู่แล็บพิสูจน์ร่องรอยในตอนต้นของซีซั่นที่ 4 แต่สุดท้ายเธอก็ย้ายกลับไปแล็บอาวุธเช่นเดิมเพราะทนกับพฤติกรรมของคนที่มาดูแล็บแทนเธอไม่ได้

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ ระดับ 3 นักสืบ ไรอัน วูลฟ์ - CSI Level 3: Detective Ryan Wolfe (แสดงโดย Jonathan Togo) ชายหนุ่มผู้มีปรารถนาอันแรงกล้าที่จะเข้าร่วมเป็นสมาชิกทีม CSI ก่อนหน้านี้เคยทำงานเป็นเจ้าหน้าที่ตำรวจ ด้วยความสามารถอันโดดเด่นผสมกับความชาญฉลาด เขาถูกเชิญเข้าร่วมทีมโดย โฮราชิโอ้ ซึ่งโดยดูนิสัยจากการดูแลรักษาปืนประจำตัวของเขาทุกครั้ง ด้วยลักษณะเช่นนี้ จึงถูกชวนเข้าร่วมทีม แทน ทิม สปีดเดิล (ครั้งหนึ่ง เพื่อนร่วมทีม ทิม สปีดเดิล เสียชีวิตในหน้าที่ อันเนื่องมาจากผลของการที่เขาไม่ค่อยดูแลรักษาปืนประจำตัว ทำให้กระสุนขัดลำกล้องยิงไม่ออก ในซีซั่นที่ 3 ตอน Lost Son ซึ่งเป็นความทรงจำฝังใจเลวร้ายของ โฮราชิโอ้ เป็นอย่างมาก ที่คิดว่าตัวเองเป็นต้นเหตุที่ทำให้เพื่อนร่วมทีมเสียชีวิต) เป็นคนที่ฉลาดและทำงานอย่างรวดเร็ว ใส่ใจในเรื่องรายละเอียดและความสมบูรณ์แบบของงานที่ทำออกมา มักมีท่าทางหยิ่งๆ ในบางครั้ง ในซีซั่นที่ 4 ตอน Nailed ไรอันถูกปืนยิงตะปูยิงเข้าที่ตา แม้เขาจะไม่ตาบอด แต่ก็ทำให้เกิดผลกระทบข้างเคียงในเรื่องการทำงานภาคสนามของเขา ในซีซั่นที่ 5 ตอน Burned ไรอันถูกไล่ออกเพราะเหตุไปเล่นการพนันในเวลางาน แต่เขาก็ยังคงแวะเวียนและมาช่วยงานให้กับทีม CSI อยู่เป็นบางครั้ง จนกระทั่งในซีซั่นที่ 6 ตอน Sunblock ไรอันได้กลับเข้ามาอยู่ในทีม CSI อีกครั้ง ในซีซั่นที่ 7 ตอน Target Specific ไรอันได้ถูกลักพาตัวไปโดยแก็งค์มาเฟียรัสเซีย ก่อนจะถูกปล่อยออกมา ในตอน Wolfe In Sheep's Clothing

• เจ้าหน้าที่แผนกสืบสวน สิบตำรวจเอก แฟรงค์ ทริปป์ - Homicide Detective: Sergeant Frank Tripp (แสดงโดย Rex Linn) เจ้าหน้าที่แผนกสืบสวนจากเท็กซัส นักสืบที่คอยให้ช่วยเหลือทีม CSI ทั้งในเรื่องการออกหมาย และการสืบพยาน มักจะปรากฏตัวพร้อมๆ กับโฮราชิโอ้เสมอ เขาสามารถทำงานร่วมกับเพื่อนร่วมทีม CSI ได้เป็นอย่างดี โดยเฉพาะอย่างยิ่งกับ คัลเล่ก์ ดูควีนส์ ปัจจุบันเขาได้หย่าร้างกับภรรยาและมีลูก 3 คน หลังจากที่เขาสอบสิบเอกผ่าน ในตอนเริ่มซีซั่นที่ 6 เขาใช้เวลาบางครั้งอยู่ในเครื่องแบบ เพื่อลาดตระเวนตรวจตราพื้นที่ต่างๆ ในเมือง แต่ไม่นานนัก เขากลับไปอยู่แผนกสืบสวนและเป็นเจ้าหน้าที่ตำรวจนอกเครื่องแบบ ตอน Guerrillas in the Mist

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ ระดับ 1 นาตาเลีย โบอา วิสต้า - CSI Level 1: Natalia Boa Vista (แสดงโดย Eva LaRue) สมาชิกใหม่แห่งทีม CSI ของซีรีส์นี้ เธอเป็นหญิงสาวสวย ทะทัดทะแมง เป็นคนเรียนรู้ไวและมีไหวพริบที่ดี ผู้เชี่ยวชาญในห้องแล็บ ซึ่งหน้าที่ของเธอ คือการออกไปสืบค้นและรวบรวมหลักฐานจากสถานที่เกิดเหตุ เธอพยายามปฏิบัติหน้าที่อย่างดีเพื่อพิสูจน์ตัวเองและลบล้างอดีตที่ยังคงติดตามหลอกหลอนเธอ เข้ามาร่วมทีมครั้งแรกในซีซั่นที่ 4 ในฐานะเจ้าหน้าที่แล็บ DNA แต่แท้จริงแล้ว เธอเป็นสายให้กับ FBI ที่ส่งมาให้สืบเรื่องความไม่ชอบมาพากลภายในแล็บ แต่สุดท้ายเธอก็เปลี่ยนใจ เลิกทำงานเป็นสายให้กับ FBI และเข้ามาเป็นสมาชิก CSI ในที่สุด นาตาเลียมีน้องสาว 2 คน และเธอเคยแต่งงานมาแล้วครั้งหนึ่ง ซึ่งในปัจจุบันได้หย่าแล้ว

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ ระดับ 1 วอลเตอร์ ซิมมอนส์ - CSI Level 1: Walter Simmons (แสดงโดย Omar Miller) เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุที่มีความเชี่ยวชาญด้านศิลปะการขโมย ที่ย้ายมาจากกะกลางคืนเพื่อมาร่วมทีมกับโฮราชิโอ้ เขาปรากฏตัวครั้งแรกในซีซั่นที่ 8 ตอน Bolt Action และถูกขึ้นเครดิตเป็นตัวละครหลักตอน Bombshell ใน ตอน Dude, Where's My Groom?

• เจ้าหน้าที่พิสูจน์ที่เกิดเหตุ ระดับ 3 นักสืบ อีริค เดลโก้ - CSI Level 3: Detective Eric Delko (แสดงโดย Adam Rodriguez) ชายหนุ่ม ที่เชี่ยวชาญเรื่องการ ค้นหาร่องรอยลายนิ้วมือและสืบค้นข้อมูลยาเสพย์ติด และเป็นผู้เชี่ยวชาญการประดาน้ำลึกในการหาหลักฐาน เขาเสมือนเป็นมือใหม่ของทีม ที่พร้อมจะทำงานได้ทุกที่ ทุกสถานการณ์ ไม่ว่าหัวหน้าทีมสั่งการอะไร เขาจะเต็มใจทำโดยทันที เดลโก้เป็นลูกครึ่งระหว่างคิวบากับรัสเซีย และมีพี่สาวชื่อ มาริซอล ซึ่งปรากฏตัวในซีซั่นที่ 4 โดยเธอเป็นโรคลูคีเมีย แต่เธอก็ถูกฆ่าตายในซีซั่นที่ 4 ตอน Rampage และนับเป็นหนึ่งในเรื่องราวฝั่งใจของเดลโก้ (เรื่องราวฝั่งใจครั้งแรกคือ การที่ต้องเสียเพื่อนร่วมทีมและเพื่อนรักของเขาอย่าง ทิม สปีดเดิล ไปในซีซั่นที่ 3 ตอน Lost Son) ในซีซั่นที่ 5 ตอน Man Down เดลโก้ถูกยิงที่ศีรษะอาการปางตาย แต่เขาก็รอดมาได้ แต่ก็ทำให้เกิดผลค้างเคียงในเรื่องการทำงานภาคสนามของเขา ในซีซั่นที่ 7 ตอน And How Does That Make You Kill? อีริคบอกกับจิตแพทย์ส่วนตัวของเขาเกี่ยวกับความสัมพันธ์ของเขากับแคลลี่ ซึ่งในตอน The DeLuca Motel เรื่องราวนั้นก็ได้ถูกเปิดเผย หลังจากที่เขาโดนคนสะกดรอยตามไปที่ๆ เขาพักอยู่ ต่อมาเขาได้พบว่าเป็นพ่อแท้ๆ และพยายามจะฆ่าเขา ในตอน Seeing Red อีริคพยายามจะช่วยพ่อของเขาหนีออกจากโรงเก็บปืน ก่อนที่เขาจะรอดมาได้และฟื้นขึ้นมาในซีซั่นที่ 8 ตอน Out of Time ซึ่งหลังจากนั้นเขาก็ออกจากทีม CSI ไป โดยบอกเหตุผลกับแคลลี่ก่อนไปว่า "ชีวิตคนเรามันช่างสั้นนัก" ในซีซั่นที่ 9 เขากลับมาเป็นตัวละครหลักอีกครั้ง